Для обнаружения вируса чаще всего используют экспресс-методы, которые позволяют в материале:
1) обнаружить вирусные белки (антигены). Для этой цели используют серологические реакции: РИФ, ИФА, РНГА, РСК, РДО;
2) обнаружить вирусные нуклеиновые кислоты с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) или ДНК-зонда;
3) обнаружить вирионы вирусов. Электронная микроскопия позволяет обнаружить вирусы любых размеров, а крупные вирусы (вирусы оспы) можно увидеть под световым микроскопом. Этот метод называется вирусоскопия.
Электронная микроскопия используется в основном в исследовательских целях. Электронный микроскоп - сложный и дорогой прибор, в диагностических ветеринарных лабораториях его нет. Хотя исследование с его помощью - очень эффективный экспресс-метод при диагностике рота-, коронавирусных и других инфекций. Если в материале содержится не менее 10 7 вирионов на 1 мл, он не требует дополнительных методов очистки и концентрации;
4) обнаружить тельца-включения под световым или люминесцентным микроскопом.
Тельца-включения - это внутриклеточные включения, образующиеся в клетках при репродукции в них некоторых вирусов. По природе они представляют собой либо скопления (колонии) вирионов, либо измененный под действием вируса клеточный материал, либо комбинацию первого со вторым. Тельца-включения могут находиться в цитоплазме (чаще это РНК-содержащие вирусы) или в ядре (чаще это ДНК-содержащие вирусы, кроме вируса оспы), или в цитоплазме и ядре клетки (вирус чумы собак). Тельца-включения, образуемые некоторыми вирусами, получили специальное название, так, тельца-включения при оспе кур называются тельцами Боллингера, при чуме плотоядных - Ленца, при бешенстве - Бабеша-Негри и др. При обнаружении телец Бабеша-Негри в мазках головного мозга погибшего животного наличие бешенства считается доказанным. При других вирусных инфекциях обнаружение телец-включений имеет лишь вспомогательное диагностическое значение;
5) обнаружить вирусные гемагглютинины, которые являются белками некоторых вирусов (орто-, парамиксовирусов и др.).
Гемагглютинирующие вирусы способны агглютинировать эритроциты животных определенных видов в условиях соответствующих температуры и pH среды. Иногда используют реакцию гемагглютинации (РГА) для обнаружения гемагглютинирующего вируса в материале;
6) для обнаружения вируса в активной форме (инфекционной) используют довольно длительные вирусологические исследования. С этой целью применяют метод биопробы на живых чувствительных к предполагаемому вирусу системах: лабораторных животных, куриных эмбрионах, культурах клеток. В редких случаях приходится использовать естественно восприимчивых животных.
Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter .
1. Вирусы, их строение и отличие от других живых систем
2. Основы современной классификации вирусов
3. Внутриклеточные включения
4. Устойчивость вирусов, их очистка и концентрирование
5. культивирование вирусов, их патогенность и вирусологические исследования
6. Развитие вирусологии на современном этапе
Вирусы, их строение и отличие от других живых систем
Вирусы – это внеклеточная форма жизни, обладающая собственным геномом и способностью воспроизводиться только в живых клетках. По содержанию нуклеиновых кислот вирусы отличаются от живых систем, тем, что у них одна кислота (РНК или ДНК), а у других организмов их две. Число белковых молекул в вирусных белках самое разнообразное, но оно всегда больше, чем у белков высших организмов. Вирусы воспроизводят себе подобных в огромном количестве и своеобразным способом – репродукцией – так как здесь копируются молекулы нуклеиновой кислоты и по их генетической информации синтезируются вирусные белки. Репликацию нуклеиновых кислот осуществляют ферменты – они из клеточных нуклеотидов строят полинуклеотидные цепи новых молекул нуклеиновых кислот вирусов. Являясь неклеточной формой жизни, вирусы тем не менее имеют корпускулярную структуру и определенную для каждого вида морфологию. Величина вирусов варьирует в широких пределах: возбудитель ящура имеет величину до 30 нм, вирус коровьей оспы - около 200 нм. Определение величины вируса достигается фильтрацией через фильтры с известной величиной пор, центрифугированием в скоростных центрифугах, что позволяет по скорости оседания судить о величине частиц, и наконец, исследованием в электронном микроскопе. Инфекционные единицы вирусов называют вирионами. Каждый вирион состоит из нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), окруженной оболочками. Белковую оболочку называют капсидом. Структура, состоящая из нуклеиновой кислоты и окружающего ее капсида, именуется нуклеокапсидом. Различают два типа симметрии строения капсида: кубический и спиральный. У некоторых вирусов капсиды окружены второй липо - или гликопротеидной оболочкой. У отдельных вирусов выявлено наличие собственных ферментов. Нуклеиновая кислота несет в себе наследственные признаки, она непосредственно участвует в синтезе белка и, кроме того, является фактором инфекционности вируса, а белок обеспечивает антигенную специфичность и стимулирует образование антител.
Современная классификация – универсальная. Она основана на фундаментальных свойствах вирусов, из которых ведущими являются признаки, характеризующие нуклеиновую кислоту, морфологию вирусов, стратегию вирусного генома и антигенные свойства. Стратегия вирусного генома – это используемый вирусом способ репродукции, обусловленный вирусным геномом.
Так как по своим свойствам вирусы отличаются от других микроорганизмов, то по современной классификации они выделены в самостоятельную группу – царство или тип VIRA. Классификация вирусов предусматривает следующие таксономические группы: вид, род, семейство, класс, отряд, тип.
Номенклатура вирусов также является международной и универсальной. Всем вирусам присвоены латинские названия. Названия семейств принимают окончание viridae, родов – virus. Научные названия вирусов пишутся с заглавной буквы и состоят из двух латинских слов, означающих род (стоит на первом месте и пишется с прописной буквы) и вид (стоит на втором месте и пишется со строчной буквы).
Все вирусы, в зависимости от того, кого они поражают, подразделяются на следующие группы:
Ø вирусы позвоночных (человека, животных, птиц)
Ø вирусы растений
Ø вирусы простейших (микроорганизмов)
Ø вирусы беспозвоночных (насекомых)
Современная классификация охватывает более 80% известных вирусов. В основу современной классификации положено:
Ø Тип нуклеиновой кислоты и ее структура.
Ø Наличие второй липопротеидной оболочки.
Ø Размер и морфология вириона.
Ø Стратегия вирусного генома.
Ø Тип симметрии капсомеров.
Ø Число капсомеров в капсиде.
Ø Генетические взаимодействия.
Ø Круг восприимчивых хозяев.
Ø Патогенность.
Ø Географическое распространение.
Ø Способ передачи.
Ø Антигенные свойства.
Ø Чувствительность вирионов к органическим растворителям.
Ø Место репродукции вирионов.
Ø Способность агглютинировать эритроциты
Внутриклеточные включения
При ряде вирусных болезней (оспа, бешенство) обнаруживают внутриклеточные тельца-включения (элементарные тельца). При применении особых методов окраски (по Морозову, по Романовскому - Гимзе и др.) их удается увидеть в световом микроскопе. Включения могут располагаться в цитоплазме клеток и ядре. По составу они разнообразны, но в большинстве своем состоят из вирусных частиц.
Обнаружение телец-включений при ряде инфекционных болезней (например, при бешенстве) имеет диагностическое значение.
Внутриклеточные включения – это вирусный материал и реакция клетки на вирусный материал.
1. По локализации в клетке включения делятся:
1 – цитоплазматические
2 – внутриядерные
3 – смешанные
2. По составу нуклеиновой кислоты:
3. По тинкториальным свойствам:
1 – базофильные
2 – оксифильные
4. По гомогенности:
1 – аморфные
2 – зернистые
Цитоплазматические включения обнаруживаются в клетке при размножении в них крупных вирусов (оспа, бешенство). Они представлены в виде округлых, овальных или неправильной формы образований с диаметром от 1-2 до 20-30 мкм. В пораженной клетке может быть несколько включений. Чаще включения прилегают к ядру, несколько смещая его, или вообще окружают ядро и для каждого цитоплазматического включения характерна гомогенная структура.
Ядерные включения встречаются при заражении крупными и мелкими вирусами, причем ядерные включения отличаются от ядрышка своими тинкториальными свойствами.
Влияние возраста животного: у молодых включения встречаются чаще, у взрослых – реже.
Очистка и концентрирование вирусов достигается путем фильтрации через специальные фильтры с использованием синтетических смол и полимерных материалов, а также путем ультраскоростного центрифугирования. Эти методы позволяют также выделить отдельные компоненты (фракции) вирусов.
Устойчивость вирусов к воздействию факторов внешней среды и разного рода физическим факторам и химическим веществам различна и зависит от строения и химического состава вирусов, наличия защитных оболочек, от среды, в которой находится вирус. Степень устойчивости соответствует механизму передачи вируса. Наиболее устойчивы вирусы, которые передаются алиментарным путем (классическая чума свиней, ящур) или через наружные покровы (контагиозный пустулезный дерматит овец и коз). Менее устойчивы вирусы, передающиеся воздушно-капельным (респираторным) или трансмиссивным путем.
У вирусов есть две формы существования. При вегетативной форме вирус тесно связан с клеткой и его сохранность полностью зависит от клетки. Этот процесс неполно изучен.
Устойчивость вирионов изучена хорошо. В защите от факторов внешней среды основную роль выполняет белковая оболочка – капсид. И так как он у разных вирусов устроен по-разному, то и устойчивость разная (вирусы, имеющие в капсиде липиды быстро инактивируются жирорастворителями, а если их нет, то к жирорастворителям они не чувствительны).
Устойчивость вирусов имеет большое практическое значение. Способность вирусов погибать при действии одних факторов и сохраняться под действием других – широко используется при изготовлении инактивированных вакцин, консервировании вакцин.
При вирусных болезнях в организме животного идет интенсивное размножение вируса. В процессе болезни часть вирусов гибнет в организме, а часть выделяется во внешнюю среду и может сохраняться там и являться источником инфекции.
Культивирование вирусов, их патогенность и вирусологические исследования
Культивирование вирусов. Для размножения вирусов необходимо наличие живых, чувствительных к нему клеток. Поэтому культивирование вирусов осуществляют в организме восприимчивых животных, в клетках куриных эмбрионов и клетках культур тканей.
В клетку проникает нуклеиновая кислота вируса. В соответствии с заложенной в ней генетической информацией живая клетка начинает производить ферментные системы, а затем белковые компоненты и нуклеиновую кислоту вируса. После этого происходит «сборка» составных частей вируса из белковых молекул и нуклеиновой кислоты. Накопление вирусных частиц приводит, как правило, к разрушению клетки и выделению вирионов во внешнюю среду.
К использованию естественно восприимчивых животных для культивирования вирусов прибегают в настоящее время редко.
Чаще используют более прогрессивные методы. В клетках куриных эмбрионов культивируют вирусы коровьей оспы, оспы-дифтерита птиц, инфекционного ларинготрахеита, ньюкаслской болезни, чумы плотоядных.
Внедрение в практику вирусологических исследований метода культур клеток сыграло огромную роль в дальнейшем развитии вирусологии. Различают два типа клеточных культур: 1) клетки культур переживающих тканей (первично трипсинизированные) получают путем механического (измельчение) и ферментативного (трипсинизация) расщепления тканей из почек животных, плаценты, сердца, куриных эмбрионов (фибробласты куриного эмбриона); 2) клетки культур растущих тканей (перевиваемые) получают чаще всего из злокачественных опухолей. Используют также культуры диплоидных клеток, которые неопасны в канцерогенном отношении.
Выращивание культур клеток чаще производят в однослойных (монослойных) культурах. В этом случае клетки, внесенные в стеклянный сосуд, прикрепляются к одной из его стенок, образуя слой толщиной в одну клетку. Модификацией этого метода является выращивание культур клеток во вращающихся сосудах (роллерный метод), на пластинках, помещенных в сосуд, на микроносителе (гранулы полимерных материалов, на поверхности которых также образуется монослой клеток). Большинство вирусов по мере роста в однослойных культурах вызывают дегенерацию и гибель клеток, что называют цитопатогенным действием (ЦПД). Таким свойством обладают вирусы ящура, ньюкаслской болезни. Специфичность ЦПД устанавливают с помощью реакции нейтрализации со специфической сывороткой. Однако имеются вирусы, которые размножаются без проявления ЦПД (например, вирус классической чумы свиней). Существует также метод глубинного выращивания вирусов, при котором клетки находятся во взвешенном состоянии (в перемешиваемых суспензиях). Рост культур клеток и размножение вирусов происходят в питательных средах, содержащих аминокислоты, витамины, соли, глюкозу, сыворотку и другие вещества.
Патогенное действие вирусов на организм животного связано с поражением чувствительных клеток. Это сопровождается местными и общими реакциями. На месте размножения вируса наблюдают распад клеток (например, слущивание эпителия), что зачастую сопровождается внедрением бактериальной флоры и накоплением различных токсических веществ, всасывание которых приводит к повышению температуры тела, нарушению обмена веществ. Специфичность действия вирусов связана с избирательным поражением определенных органов и тканей - тропизмом.
Вирус ящура, например, поражает в основном эпителиальные ткани, а бешенство - нервную ткань.
Общие реакции проявляются прежде всего повышением температуры тела, угнетением, отказом от корма. Отмечают также изменения форменных элементов и состава крови, образование антител, появление других клинических реакций (нарушение деятельности сердечно-сосудистой, дыхательной, пищеварительной систем), возникновение патологоанатомических изменений (воспалительные процессы лимфоидной ткани и др.).
Установлена возможность длительного вирусоносительства. Примером может служить вирус герпеса, патогенное действие которого проявляется лишь на фоне ослабления резистентности организма.
Некоторые вирусы (вирус классической чумы свиней) могут также длительно находиться в организме переболевшего животного.
Вирусологическое исследование - комплекс лабораторных исследований (биологических, морфологических, серологических), направленных на распознавание этиологии вирусной болезни, выделение и изучение ее возбудителя, а также на обнаружение в крови больных и переболевших животных специфических антител.
Возможность выделения вируса зависит от правильности взятия и хранения материала. В зависимости от характера болезни вирус выделяют путем заражения лабораторных или сельскохозяйственных животных, развивающихся куриных эмбрионов или культуры тканей. С целью дальнейшего изучения вирусы культивируют на чувствительных объектах. Изучают биологические свойства выделенного вируса: устойчивость к воздействию разных температур, красителей, лучистой энергии, рН среды, течение болезни у лабораторных животных. В РСК, реакциях нейтрализации, иммунофлуоресценции, гемагглютинации и задержки гемагглютинации, преципитации и др. определяют антигенные свойства выделенного вируса. Некоторые из этих реакций используют и для определения наличия антител в крови животных по заведомо известному вирусному антигену. По комплексу признаков, присущих выделенному вирусу, производят его идентификацию, то есть устанавливают принадлежность к определенному виду. Совокупность данных эпизоотологических, клинических, патологоморфологических, вирусологических и серологических исследований позволяет поставить диагноз при возникновении болезни вирусной этиологии.
Развитие вирусологии на современном этапе
Причины интенсивного развития вирусологии в последние годы:
1. Вирусные болезни занимают ведущее место, охватывают большое количество людей, животных и встречаются в 6-7 раз чаще, чем бактериальные болезни.
2. Против вирусных болезней не разработаны хорошие биологические препараты.
3. В последние годы получила признание вирусная теория происхождения опухолей (Зильбер). 150 видов вирусов могут вызвать опухоль.
Более 40 лет назад родилась генная инженерия (планирование) – можно конструировать новые живые системы.
5. В последние годы среди молодняка животных получили широкое распространение пневмоэнтериты. В появлении вспышек этих заболеваний тесно взаимодействуют инфекционныен вирусы и стрессовые факторы, причем вирусы действуют не в одиночку, а в сочетании с другими вирусами, микробами.
6. Установлено, что вирусы являются одной из причин внутриутробных патологий
7. Вирусы можно использовать в борьбе с насекомыми, с вредителями сельскохозяйственных культур.
В ветеринарной клинике неврологии, травматологии и интенсивной терапии доктора Сотникова помимо других услуг осуществляется лечение рептилий. Эта область, к сожалению, не сильно развита в нашей стране, поэтому в нашем отделении герпетологии встречаются пациенты, диагноз которым не могли поставить многие ветеринарные врачи других клиник. Так, одним их самых проблемных заболеваний в лечении змей является болезнь телец включений.
Болезнь телец включений (IBD- Inclusion Body Disease) – это инфекционное заболевание, вызывающее системное нарушение клеточного метаболизма рептилий, индуцированное ретровирусом и имеющее характерные клинические манифестации (проявление первых симптомов, начало видимой части болезни).Данное заболевание у змей вызывает РНК-содержащий вирус из семейства Retroviridae. В основном данное заболевание поражает боид (питонов, удавов). Сомнительные случаи болезни телец включений были описаны у ужеобразных змей, маисовых полозов, пальмовых ботропсов.
IBD у змей характеризуется хроническим поражением клеток, не приводящим на раннем этапе к их разрушению, образованием крупных эозинофильных включений в цитоплазме различных клеток эпителия и нейронах центральной нервной системы.
Источником инфекции являются персистентные (длительные) носители и клинически больные животные. Распространение, вероятно, происходит: с помощью пассивной передачи змеиным клещом; контактно; через пищу и воду, а также путем вертикальной передачи – от родителей к потомству.
Клинически болезнь у змей проявляется истощением организма, слабостью, снижением активности физиологических процессов, затруднением или нарушением линьки, стоматитом, пневмонией, неврологическими расстройствами - неравенством величины зрачков, задиранием и подергиванием головы, искривленным положением колец тела, опистотонусом (судорожная поза «дуги»). Некоторые змеи с IBD имеют клинику лимфомы, лейкоцитарные реакции, кожные новообразования.
Патогномоничным симптомом, то есть однозначно описывающим болезнь, для удавов и питонов считают воспаление и формирование абсцессов (очаговых гнойных воспалений, которые характеризуются образованием полостей, заполненных гноем) в салитарных фолликулах пищевода, развитых у ложноногих змей.
Диагностика болезни телец включений в нашей стране может быть осуществлена при помощи гистологического исследования желез пищевода, полученного при эзофагоскопии с последующей биопсией, и обнаружение в цитоплазме клеток крупных эозинофильных включений. Включения изредка можно обнаружить в миелоцитах и лимфоцитах костного мозга или мазках периферической крови. При лейкоцитарных реакциях включения выявляются в цитоплазме приблизительно в 1 % периферических лимфоцитов.
Тема 3. Индикация вирусов в патологическом материале по обнаружению вирионов и вирусных телец-включений
Задание к следующему занятию
Подведение итогов занятия
Контрольные вопросы:
1. Каковы общие правила взятия материала от больных животных и трупов?
2. Как консервируют и транспортируют патологический материал?
3. Что вы знаете о подготовке патологического материала к исследованию?
Цель занятия: ознакомить студентов с методами прямого обнаружения вируса в исследуемом материале. Освоить технику приготовления мазка из вируссодержащего материала и методику окраски мазков по Морозову. Ознакомиться с устройством и принципом работы электронного и люминесцентного микроскопов. Изучить приготовление препаратов для просмотра в электронном микроскопе.
Оборудование и материалы: световые микроскопы, вируссодержащий материал, предметные стекла, спиртовки, фильтровальная бумага, эксикаторы, мостики, промывалки с дистиллированной водой, песочные часы, жидкость Руге, протрава, красящий раствор аммиачного серебра, электронный и люминесцентный микроскопы, схема строения электронного микроскопа, фотографии вирусов под электронным микроскопом, фоторепродукции вирусов в поле люминесцентного микроскопа (РИФ), мультимедийное оборудование, презентации MS Office Power Point и плакаты по теме занятия.
Объяснение преподавателя: Вирусы находящиеся в живых клетках одно- и многоклеточных организмов представлены чаще всего в виде скоплений не связанных между собой молекул (или частей молекул) РНК или ДНК, в которых закодирована генетическая информация о вирусных белках. В результате реализации этой информации в тех же клетках синтезируются и накапливаются молекулы вирусных белков. Внутри клеток все вирусные молекулы (ДНК, РНК, белки) защищены от разрушительного действия внеклеточных факторов (ферментов, кислот, температуры, излучений и др.). Если же вирусы оказываются вне клеток, то быстро разрушаются.
3.1 Методы прямого обнаружения вируса в исследуемом материале. Многие вирусные белки, которые называются структурными, обладают свойством самопроизвольно под действием межмолекулярных сил собираться в комочки, агрегаты (процесс самосборки). В каждый такой агрегат включается обычно по одной молекуле вирусных ДНК или РНК. Иногда в них могут включаться еще и липиды клеточного происхождения. Образующиеся таким путем частицы называются вирионами. В вирионах молекулы белков так взаимно ориентированы, что на них не могут действовать протеолитические ферменты, а молекулы вирусных ДНК или РНК оказываются недоступными для нуклеаз и защищенными ох действия физических факторов среды. Формирование вирионов каждого отдельного вируса возможно только в клетках определенного типа.
Вирионы можно рассматривать как покоящуюся неактивную форму существования вирусов. Поэтому в форме вирионов вирусы могут определенное время находиться и вне клеток без потери биологической активности.
Крупные вирусы (оспа, эктима), видимые в иммерсионной системе светового микроскопа получили название элементарные тельца.
Внутриклеточные тельца-включения – это обломки скоплений вирусных частиц или продукт реакции клетки на вирусную инфекцию. Их классифицируют по месту локализации в клетке, по гомогенности, по составу нуклеиновой кислоты, по тинкториальным свойствам.
При ряде вирусных инфекций обнаружение телец - включений имеет диагностическое значение. Многие из них настолько типичны, что обнаружение их стало одним из основных экспресс-методов диагностики бешенства, оспы, ринопневмонии лошадей, ринотрахеита крупного рогатого скота.
3.2 Методы окраски вирионов. Существует много методов окраски мазков, мазков - отпечатков. Самым распространенным является метод окраски по Морозову. Метод окраски прост, не требует дефицитных реактивов, выполним на занятиях.
Приготовленные мазки сушат на воздухе, помещают в вертикальном положении в дистиллированную воду на 10-15 минут и красят. Для окраски по Морозову готовят три реактива.
1) жидкость Руге.
2) протраву
3) красящий раствор аммиачного серебра.
Рассматривают препарат в иммерсионной системе. Элементарные тельца на светло - коричневом фоне препарата имеют вид темно - коричневых почти черных мелких зерен, образований.
Тельца-включения, образуемые рядом вирусов, получили специальные названия. Так, цитоплазматические тельца - включения, образуемые в нервных клетках млекопитающих вирусом бешенства, называют тельца Бабеша-Негри, в эпителиальных клетках овец - вирусом оспы овец - тельца Борреля, вирусом оспы кур - тельца Болингера. Как правило, РНК-содержащие вирусы образуют цитоплазматические, а ДНК-содержащие – внутриядерные тельца-включения Небольшая группа вирусов вызывает образование телец-включений обоих типов. Наибольшее практическое значение приобрели тельца Бабеша-Негри в диагностике бешенства. Из кусочков определенных отделов головного мозга (Аммоновых рогов, мозжечка, продолговатого мозга) готовят гистологические срезы. Полученные препараты окрашивают по методу Муромцева, Туревича, Селлерса и др. Каждый метод окраски дает свою характерную картину.
3.3 Устройство и принципы работы электронного и люминесцентного микроскопов. При любых микроисследованиях необходимо именно точные сведения о морфологических особенностях интересующего нас организма. Эти сведения не могут быть получены иначе, как путем изучения данного организма под микроскопом. В силу этого микроскоп становится важнейшим орудием для практического изучения микроорганизмов, и знакомство с ним является первым условием успеха в этой работе.
Целью различных видов микроскопии являются дальнейшее изучение морфологии вирусов и дифференциальная диагностика инфекционных болезней. По схеме строения электронный микроскоп аналогичен световому. В отличие от светового в электронных микроскопах изображение получается с помощью потока электронов.
Пучок электронов проходит через исследуемый препарат и его изображение проецируется на люминесцентный экран. Источником электронов является электронная пушка (вольфрамовая нить), нагреваемая электротоком. Электроны ускоряются и направляются вниз по колонке, проходя через несколько магнитных линз (конденсорная, объективная, проекционная). На экране возникает видимое изображение объекта, которое можно сфотографировать или просматривать на экране монитора (рис.7).
Чтобы предотвратить поглощение электронов воздухом, из микроскопа откачивают воздух вакуум - насосом.
Основные части микроскопа: колонка, панель управления, пишущее устройство, вакуумная система, соединительные кабели. В нижней части электронного микроскопа расположены масляные и диффузные насосы.
Максимальная разрешающая способность электронного микроскопа 2А°. По характеру исследования объектов различают микроскопы просвечивающего типа, сканирующие, эмиссионные, теневые.
При работе с электронным микроскопом важное значение имеет подготовка препаратов. Для просвечивающего электронного микроскопа исследуемые объекты должны быть в виде тонких срезов или вирусных суспензий. Объекты помещают на медные сеточки с подложками.
3.4 Методы подготовки препаратов: метод негативного контрастирования, метод отпечатков, метод напыления, метод ультратонких срезов.
Материалом для электронно-микроскопических исследований вирусов могут быть смывы со слизистых оболочек, содержимое кишечника, кожные поражения, корочки, кусочки органов и тканей, аллантоисная жидкость куриного эмбриона, вируссодержащая культуральная жидкость культуры клеток. При подготовке препаратов большое значение имеет концентрация вируса в материале и степень его контаминации балластными веществами. В зависимости от этих факторов и выбирают методику подготовки исходного материала.
С помощью электронного микроскопа в отдельных случаях в считанные минуты по морфологии вирусных частиц можно определить таксономическое положение вируса.
Метод иммунофлуоресценции называют еще РИФ, метод меченых антител.
Принцип РИФ основан на использовании явления флюоресценции, который состоит в испускании света атомами вещества, поглотившими избыточную внешнюю энергию и пришедшими в состояние возбуждения. При этом используют люминесцентную микроскопию (рис. 7)
Рисунок 7. Люминесцентный микроскоп МЛ-2
В диагностических исследованиях методом РИФ в качестве объекта исследования могут быть мазки – отпечатки, срезы органов и тканей, соскобы, гистологические срезы, препараты тканевых культур.
При прямом методе РИФ мазок - отпечаток обрабатывают сывороткой, меченной антителами, гомологичными тому вирусу, наличие которого предполагается. Если в мазке содержится антиген, гомологичный антителам сыворотки, то образуется комплекс антиген + антитело. Препараты отмывают, сушат и исследуют под люминесцентным микроскопом, который устроен так, что на препарат падает пучок сине-фиолетовых лучей, а в глаз наблюдателя попадают только желто-зеленые лучи, которые испускает комплекс антиген + антитело. По этому свечению и судят о наличии в материале антигенов, гомологичных антителам меченой сыворотки.
Непрямой метод состоит в том, что мазок - отпечаток обрабатывают дважды: вначале немеченой антивирусной сывороткой, а затем после отмывания - меченной антивидовой. После второго отмывания препарат высушивают и исследуют под люминесцентным микроскопом. Обнаружение в препарате специфической флюоресценции указывают на наличие в материале антигенов, гомологичных использованной противовирусной сыворотке.
По эффективности непрямой метод имеет преимущества перед прямым методом.
В целом метод флюоресцирующих антител обладает рядом достоинств перед другими методами.
Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь
inclusion bodies - тельца включения.
Mелкие частицы, наличие которых отражает патологические изменения в клетке в результате заражения ее вирусом.
(Источник: «Англо-русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд-во ВНИРО, 1995 г.)
Ветеринарный энциклопедический словарь
Толковый словарь по почвоведению
Большой медицинский словарь
Большой медицинский словарь
Строительный словарь
Строительный словарь
Геологическая энциклопедия
Геологическая энциклопедия
Геологическая энциклопедия
Геологическая энциклопедия
Энциклопедический словарь по металлургии
Энциклопедический словарь Брокгауза и Евфрона
Большая Советская энциклопедия
Толковый словарь Ефремовой
Заговор Тельца Если на дворе весна, время с 21 апреля по 20 мая, то лучше всего подойдет заговор с преобладанием стихии земли и упоминанием Венеры времен раннего христианства – Богородицы, ведь именно мягкая и женственная Венера является планетой – управителем
Питание Тельца Правильно подобранное и сбалансированное питание может сыграть неоценимую роль для поддержания в форме своего тела и организма. В питании Тельцам следует употреблять больше растительной пищи и молочных продуктов. Рекомендуются тушеные овощи и салаты из
Блюда для Тельца Сельдь рубленая с морской капустойСостав: сельдь 250–300 г, хлеб пшеничный 50–100 г, вода 1/2 стакана, лук репчатый 1–2 шт., яблоки 1 шт., яйцо куриное 1 шт., масло растительное 1–2 ст. ложки, морская капуста свежезамороженная 100–150 г, уксус 3 %-ный 1–2 ст. ложки.Сельдь
II. Включения
13.2. Принесение в жертву Тельца-Христа Культ Митры и жертвоприношение Тельца-Быка Проанализируем рассказ Тита Ливия.1) В книге «Реконструкция», гл. 16:2, мы уже много говорили, что Овен или Агнец - один из известнейших образов Христа. Который тесно связан именно с распятием
Включения в янтаре Удивление и восторг вызывают закованные внутри солнечных камешков древние насекомые и растения. Такие включения называются инклюзами и являются подтверждением растительного происхождения камня.В янтаре учеными было обнаружено и описано более 900
Отношение включения Отношение включения между двумя вариантами использования указывает, что некоторое заданное поведение для одного варианта использования включается в качестве составного компонента в последовательность поведения другого варианта использования.
Глава 10. ЖЕСТЫ ВКЛЮЧЕНИЯ В жизни мы часто выполняем жесты включения, не задумываясь об их глубинном смысле. Это особые позы тела, а также соединения рук и пальцев, которые позволяют включать скрытые возможности, концентрировать их на каком-то действии. А самое главное -
Практика включения перспектив Модуль ума в ПИЖ обладает двумя основными измерениями:1. Практика, укрепляющая ваши способности к более тонкому, целостному и точному восприятию различных перспектив.2. Практика расширения умственных моделей, применяемых для организации
«Якорь» включения в работу Любите ли вы музыку? Как известно, музыка всегда влияет на психофизиологические механизмы нашего организма.Подумайте, какая музыка (песня) поднимает вам настроение и общий уровень энергетики?Какая мелодия успокаивает вас и расслабляет душу и
